HRM解析専用蛍光試薬

HRM解析専用蛍光試薬 LC GreenPlus & LightScanner Master Mix

  • HRM（High-Resolution Melting）は

    遺伝子変異を迅速にスクリーニングする手法です。
    二本鎖DNAは温度上昇に伴い一本鎖DNAへと融解します。融解の過程は二本鎖DNAに特異的に結合する蛍光色素によって追跡することが可能です。

    二本鎖DNAの融解に伴い蛍光色素が解離するため、蛍光強度が減少します。温度に対して蛍光強度をプロットすることで二本鎖DNAの融解過程を示す融解温度曲線が得られます


HRM解析専用蛍光試薬
  • LC GreenPlusは

    BioFire Defense社（旧アイダホテクノロジー社）により開発された、二本鎖DNAに飽和して結合するHRM専用蛍光色素です。

    高い蛍光強度を持ち、温度上昇に伴う蛍光強度の変化を捉えて解析を行います

    置換、挿入、欠失などの変異があるDNAフラグメントの融解温度曲線の差を識別し、変異検体をスクリーニングします。

LC GreenPlusについて

HRM解析専用蛍光試薬
  • 飽和状態で二本鎖DNAに入り込む、HRM解析専用に開発された蛍光試薬です
  • 励起波長440～470 nm
    蛍光波長470～520 nm
  • 10×溶液
  • 10 mM Tris-HCl
    pH7.4 （0.1 mM EDTA含有）に溶解
  • PCR反応液9に対して、10×溶液を1添加
  • 未開封の試薬は -20℃で保存
  • 開封後、溶解した試薬は4℃で保存（溶解後は2ヶ月以内に使用します）

LC GreenPlus オーダーインフォメーション

製品番号 製品 梱包内容
BCHM-ASY-0005 LC GreenPlus 1,000反応分※ 1mL入りバイヤル×1本
BCHM-ASY-0006 LC GreenPlus 10,000反応分※ 1mL入りバイヤル×10本
価格につきましてはお問い合わせください。

※PCR反応量を10μLとした場合

LightScanner Master Mixについて

HRM解析専用蛍光試薬
  • HRM解析におけるPCRのワークフローを効率化・簡略化し、且つ最適な結果が得られるよう調製された専用試薬です
  • ホットスタート酵素、dNTP、LC GreenPlusを含む2.5×溶液
  • PCR反応液6に対して、2.5×溶液を4添加
  • 未開封の試薬は -20℃で保存
  • 開封後、溶解した試薬は4℃で保存（溶解後は2ヶ月以内に使用します）

LightScanner Master Mix オーダーインフォメーション

製品番号 製品 梱包内容
HRLS-ASY-0002 LightScanner Master Mix 100反応分※ 2.5×Master Mix溶液（100反応）× 1本
10 mM MgCl2 　　　 × 1.5 mL
水（Reagent Grade） × 1.5 mL
ユーザーガイド付
HRLS-ASY-0003 LightScanner Master Mix 500反応分※ 2.5×Master Mix溶液（100反応）× 5本
10 mM MgCl2 　　　 × 1.5 mL
水（Reagent Grade） × 1.5 mL
ユーザーガイド付
価格につきましてはお問い合わせください。

※PCR反応量を10μLとした場合

参考文献

  1. Olsen RK, Dobrowolski SF, Kjeldsen M, Hougaard D, Simonsen H, Gregersen N, Andresen BS. (2010). High-resolution melting analysis, a simple and effective method for reliable mutation scanning and frequency studies in the ACADVL gene. J Inherit Metab Dis. 33(3): 247-60.
  2. Hulvey J, Young J, Finley L, Lamour K. (2010). Loss of heterozygosity in Phytophthora capsici after N-ethyl-nitrosourea mutagenesis. Mycologia. 102(1): 27-32.
  3. Audrezet MP, Dabricot A, Le Marechal C, Ferec C. (2008). Validation of high-resolution DNA melting analysis for mutation scanning of the cystic fibrosis trans-membrane conductance regulator (CFTR) gene. J Mol Diagn. 10(5): 424-34.
  4. Wittwer CT, Reed GH, Gundry CN, Vandersteen JG, Pryor RJ. High-resolution genotyping by amplicon melting analysis using LC Green. Clin Chem. 2003 Jun; 49(6):853-60.
  5. Chou, L.-S., Lyon, E. and Wittwer, C. T. A comparison of high-resolution melting analysis to denaturing high performance liquid chromatography for mutation scanning: cystic fibrosis transmembrane conductance regulator gene as a model. Am J Clin Pathol, 2005 Sep; 124(3):330-8.
  6. Herrmann MG, Durtschi JD, Bromley LK, Wittwer CT, Voelkerding KV. Amplicon DNA melting analysis for mutation scanning and genotyping: Cross-platform comparison of instruments and dyes. Clin Chem. 2006 Mar; 52 (3):494-503. Epub 2006 Jan 19.