F-キット エタノールの定量操作方法

• メスシリンダーまたはガラスピペットを用いてビン1の溶液を（錠剤）溶解用容器にビン2の錠剤1錠当り3mLの割合で加えます。
• ビン2の錠剤を付属のピンセットで取って（錠剤）溶解用容器に加え、泡立てないよう穏やかに溶解します。試薬が安定するまで約15分間静置します。
• ビン3の酵素懸濁液が均一になるように詮をしたまま倒してローリング（振盪）します。

• 各キュベット（セル）に各3mLの溶液IIを加えます。

• 試料またはブランク用水 各0.1mLをキュベット内の溶液 (溶液II) の水面下に流し入れます。
  ※ピペッターのチップ先端が外気に触れないようにしてください。
• パラフィルム等で各キュベットを密封し、泡立てないよう2～3回緩やかに倒置攪拌をします。

• 混和して約3分間静置した後、分光光度計（波長340nm）で各キュベットの吸光度(E1)を測定します。

・・・酵素反応前の検体とブランクを測定します。

• パラフィルムを少し開けて、溶液Ⅲ(ビン 3) 0.05 mLを加えます。（または各キュベット毎に攪拌棒［別売品］を準備し、溶液Ⅲ(ビン 3) 0.05 mLを撹拌棒先端［へら部分］にのせて各キュベット内に入れ攪拌します。）
  泡立てないよう2～3回穏やかに倒置撹拌します。

• 混和後、20℃以下（室温）で約10分間静置した後、再び吸光度(E2)を測定しま す。

・・・酵素反応後に生成した NADH を測定します。