E-液状キット アンモニア

方法

グルタミン酸デヒドロゲナーゼ（GLDH）を用いた酵素UV試験法

測定原理

本測定キットに含まれる清澄化試薬により、ミルクの試料を10倍希釈（1：10）することにより、直ぐに測定ができます（試料の調製法および測定法の項を参照下さい）。

保存条件および試薬の安定性

コンタミを避け、＋4℃で保存した場合、試薬類は表示の有効期限の月末まで安定です。凍結はしないで下さい。

警告および使用上の注意

1. 試薬は保存剤としてアジ化ナトリウム（0.95g/l）を含んでいます。飲み込まないようご注意下さい。また皮膚や粘膜に触れないようご注意下さい。
2. 研究用試薬を使用する場合に必要な使用上の注意をお守り下さい。

試薬調製

試薬類および標準液はそのまま直ぐに使用できます。

追加（添付はされておりませんが測定に必要なもの）

蒸留水（無菌状態で重金属を含有してない）および一般的な実験用器具を使用します。

包装内容および試薬濃度

測定操作

波長：340nm、Hg334nm、Hg365nm
光路長：1.00cm
温度：室温（＋20℃～）/＋37℃
測定対照：水

以下の手順に従って手動で測定する場合、試薬ブランクは試験のたびに測定し、結果の計算には試料の測定値から差し引いてください。試料ブランクは試料それ自身に測定への影響が考えられる時にのみ設定してください。

試薬ブランク

注）
R1とR2は予め混合し1種類の試薬のようにして使用します。R1を4部、R2を1部（例 R1 20ml＋R2 5ml）混合し、混合液2500μlを測定に使用します。混合液は＋4℃で1週間安定ですが、光を遮蔽しておく必要があります。

計算

RBを使用して測定した場合：
　ΔA＝（A₂－df×A₁）試料－（A₂－df×A₁）_RB
SBを使用して測定した場合：
　ΔA＝（A₂－df×A₁）試料-（A₂－df×A₁）_SB-（A₂－df×A₁）_RB
　df；吸光度測定用に行った希釈、および反応液量を
　考慮した係数で、
　df＝（試料液量＋R1＋R2）/（試料液量＋R1＋R2＋R3）＝0.839
　となります。

従って計算式は以下のようになります。
　C_{アンモニア}[g/l 試料液量]＝V×MW×ΔA/ε×d×v×1000
　V（終量）（反応液量）＝3100[μl]
　MW（分子量）＝17.03[g/mol]
　d（光路長）＝1.00[cm]
　v（試料液量）＝100[μl]
　ε（NADHの吸光係数）[ mmol^-1×cm^-1]： 340nm＝6.3、334nm＝6.18、365nm＝3.4

よって、定量結果は以下のように計算されます。
　340nm：C_{アンモニア}[g/l]＝0.0838×ΔA
　334nm：＝0.0854×ΔA
　365nm：＝0.1553×ΔA

上記の係数はパラメータを変更した場合（例えば試料液量等）、再計算をし直してください。
試料の調製において、分析試料を希釈した場合は、これに希釈率を掛けてください。

固体試料についての計算は

C_{アンモニア}[g/100g]＝（C_{アンモニア}[g/l 試料液量] /秤量_試料[g/l 試料液量]）×100

キャリブレーション（校正）用および測定用コントロール

自動吸光度測定システム用、ならびに精度および正確度管理用内部標準用として、新鮮なコントロールを調製する必要があります。硫酸アンモニウム25mg（分子量=132.1）を100ml容メスフラスコに正確に秤取し、蒸留水を加えて溶解後、更に標線まで加えて液量を100mlに調節します。アンモニアの濃度として64mg/lとなります（24mg秤取した場合は、24×64/25＝61.4mg/lとなります）。コントロールは常に新鮮なコントロールを使用します。

特長

1. 測定範囲：
   本法は10～70mg/lの範囲内のアンモニア（340nmで測定）を測定することができます。測定範囲の上限を超した場合は、試料を希釈して再測定してください。計算の際には希釈係数をかけます。
2. 特異性：
   本法はアンモニアに特異的な方法です。妨害因子は知られておりません。
3. 検出限界：
   340nm測定で、0.3mg/lがアンモニアの最小検出濃度です。検出限界は、アンモニアを含まない試料を20回測定し、その標準偏差値を3倍した数値に相当します。