マルチモードプレートリーダー トライアドLT

蛍光上方測定の主なアプリケーションとしては、
　・核酸・タンパク質の定量
　・蛍光イムノアッセイ（FIA）
　・酵素活性測定
　・代謝物定量
があります。

トライアドでは励起光は収束されウェルに入射します。
したがって、励起光が通過する体積はウェル全体の体積に
比べると小さくなります。

96ウェルと384ウェルで、実際に励起される試料体積は
大きく異なりませんので、測定性能はマイクロプレートの
ウェル数にかかわりません。

トライアドでは励起光の焦点の高さに調整すること
ができます。
ウェルのほぼ中央に焦点をあわせると、シグナル/
バックグランドが高くなり、最適な測定ができます。

光源からの光はバンドパスフィルターを通過したのち、
ビームスプリッターからウェルに向かいます。
ウェルを通過した光はフォトダイオードにフォーカス
されます。

吸光測定の主なアプリケーションには、
　・酵素免疫測定（ELISA）
　・核酸/タンパク質定量
　・酵素反応解析
　・細胞バイアビリティー/細胞毒性/細胞増殖アッセイ
があります。

ウェル下方からの検出系は、細胞を用いたアッセイに
適しています。

下方測定ではプラスチックプレートからの蛍光により
シグナル/ノイズ比が低下してしまいます。

しかしながら、上方測定では細胞培養液からの蛍光
によるシグナル/ノイズ比の低下が、特に500nmより短い
波長の蛍光の場合、より顕著にデータに影響します。

このため、細胞を用いたアッセイでは蛍光下方測定
が行われます。

細胞を用いた蛍光下方測定のアプリケーションには、
細胞内カルシウムなどのイオン濃度やpH/膜電位変化、
蛍光タンパク質によるレポーターアッセイ、
細胞バイアビリティー細胞増殖アッセイ、細胞毒性試験
があります。

下方測定をする場合、一つのウェルで何点か位置を
変えて測定します。

蛍光偏光測定の化学系は蛍光上方測定系の励起光と
蛍光の光路上に偏光フィルターが追加され、
一定方向に振動する光（偏光）だけが通過します。
静止した蛍光物質に偏光励起光を照射すると、
蛍光も偏光として放出されます。

溶液中では分子は常に運動をしており静止しておらず、
小さい分子は速く運動し、大きい分子はゆっくり運動
します。

分子量が小さい蛍光体は励起されてから蛍光を放出
する間に回転運動をしてしまい、一定の方向に振動
する偏光で励起しても蛍光はさまざま方向に振動
する光となります。
そのため偏光フィルターを通過する蛍光量は
少なくなります。

一方、小さな蛍光体が、抗体やレセプタータンパク質
など分子運動が小さい高分子物質と結合すると、
蛍光体が励起されてから蛍光を放出する間の回転運動
は無視でき偏光を維持した蛍光が放出されます。

蛍光偏光免疫測定法ではフリーの抗原を洗浄して
取り除く必要がないという利点があります。

ランタノイドキレートのように寿命の長い蛍光体に励起光
をパズル状に照射します。

生体試料に由来する短寿命蛍光や光散乱が減衰
（照射後100～400μ秒後）したのち、目的の長寿命
蛍光を測定します。

バックグランド蛍光がない状態で測定するので感度が
高くなります。
パルス照射と蛍光測定とを繰り返して測定します。